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**試驗用試劑和培養(yǎng)基配方
日期：2025-02-08 23:29
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摘要：
**試驗用試劑和培養(yǎng)基配方
1.磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）
無水磷酸氫二鈉 2.83g
磷酸二氫鉀 1.36g
蒸餾水加至 1000ml
將各成分加入到 1000ml 蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào) pH 至 7.2～7.4，于 121℃壓力蒸氣** 20min備用。
2.革蘭染色液
第1液：結(jié)晶紫溶液
結(jié)晶紫乙醇飽和溶液 100ml
結(jié)晶紫 4g～8g
95%乙醇 100ml
1%草酸胺溶液
第2液：盧戈碘液
碘化鉀 2g
碘 1g
蒸餾水 200ml
第3液：脫色劑
（1）95%乙醇
（2）丙酮乙醇溶液 100ml
95%乙醇 70ml
丙酮 30ml
第4液：稀釋石炭酸復(fù)紅液
堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液 10ml
堿性復(fù)紅 5g～10g
5%石炭酸溶液 90ml
蒸餾水 900ml
3.孔雀綠與沙黃芽孢染色液
第1液 5.0%孔雀綠水溶液
第2液0.5%沙黃水溶液
4.無菌檢驗用洗脫液
吐溫-80 1g
蛋白胨 10g
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000ml
將各成分加入到 1000ml 0.03mol/L PBS液中，加熱溶解后調(diào)pH至 7.2～7.4，于121℃壓力蒸汽**20min備用。
5.標(biāo)準(zhǔn)硬水(硬度342mg/L)
氯化鈣(CaCl2) 0.034g
氯化鎂(MgCl2·6H2O) 0.139g
蒸餾水加至 1000ml。
6.有機(jī)干擾物
牛血清白蛋白 30g
蒸餾水 1000ml
溶解后用微孔濾膜(孔徑為0.45μm)濾過**，冰葙保存?zhèn)溆谩?/div>
7.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 5g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000ml
除瓊脂外其他成份溶解于蒸餾水中，調(diào) pH 至 7.2～7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝，于121℃壓力蒸汽**20min備用。
8.營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000ml
將各成分溶解于蒸餾水中，調(diào) pH 至7.2～7.4，分裝，于121℃壓力蒸汽**20min備用。
9.稀釋液：胰蛋白胨生理鹽水溶液（TPS）。
胰蛋白胨 1.0g
氯化鈉 8.5g
先用900ml以上蒸餾水溶解，并調(diào)節(jié)pH值在7.0±0.2，*終用蒸餾水加至1000ml，分裝后，經(jīng)121℃壓力蒸汽**后使用。
10.胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）
胰蛋白胨 1.5%
大豆蛋白胨 0.5%
氯化鈉 0.5%
用蒸餾水配制而成，調(diào)節(jié)pH為7.2±0.2，經(jīng)121℃壓力蒸汽**后使用。
11.胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）
胰蛋白胨 1.5%
大豆蛋白胨 0.5%
氯化鈉 0.5%
瓊脂 1.6%
用蒸餾水配制而成，調(diào)節(jié)pH為7.2±0.2，經(jīng)121℃壓力蒸汽**后使用。
12.品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基
蛋白胨 10g
酵母浸膏 5g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
瓊脂 15g～20g
磷酸氫二鉀 3.5g
無水亞硫酸鈉 5g
5%堿性品紅乙醇溶液 20ml
蒸餾水 1000mg
以上各成分蒸餾水溶解，調(diào)pH 至7.2～7.4，裝瓶，經(jīng)121℃壓力蒸汽**后使用。
13.溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液
蛋白胨 10g
葡萄糖 5g
可溶性淀粉 1g
溴甲酚紫乙醇溶液 10ml
蒸餾水 1000ml
將蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 至 7.0～7.2，加入2% 溴甲酚紫酒精溶液，搖勻后，分裝(每管5ml)，并放入一個小倒管，于 115℃壓力蒸汽**30min。置4℃冰箱備用。
14.嗜熱脂肪桿菌恢復(fù)瓊脂培養(yǎng)基
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
可溶性淀粉 1g
葡萄糖 1g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000ml
以上各成分蒸餾水溶解，調(diào)pH 至7.0～7.2，裝瓶，經(jīng)115℃壓力蒸汽**30min后使用。
15.需氧-***瓊脂培養(yǎng)基
酪胨(胰酶水解) 15g
牛肉膏 3g
葡萄糖 5g
氯化鈉 2.5g
L-胱氨酸 0.5g
硫乙醇酸鈉 0.5g
酵母浸出粉 5g
新鮮配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
(或新配制的 0.2% 亞甲藍(lán)溶液 0.5ml
瓊 脂 0.5g~0.7g
蒸餾水 1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份加入蒸餾水中，微溫溶解后，調(diào) pH 至弱堿性，煮沸、濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào) pH 至 6.9～7.3，分裝于 115℃壓力蒸汽** 30min。
16.沙堡瓊脂培養(yǎng)基
葡萄糖 40g
蛋白胨 10g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000ml
將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH 至5.6±0.2，于 115℃壓力蒸汽** 30min備用。
17.沙堡液體培養(yǎng)基
葡萄糖 40g
蛋白胨 10g
蒸餾水 1000ml
將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH 至5.6±0.2，于 115℃壓力蒸汽** 30min備用。
18.無菌試驗用**培養(yǎng)基
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 1g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.5g
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
蒸餾水 1000ml
除葡萄糖外，上述各成分加入蒸餾水內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH 約6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，搖勻濾清，調(diào)pH 使**后為6.4±0.2，分裝，115℃壓力蒸汽**20min備用。
19.人**細(xì)胞維持培養(yǎng)基
1640干粉培養(yǎng)基 10×10.4g
L谷氨酰胺 2.93g
丙酮酸鈉 1.004g
青霉素 80萬單位
鏈霉素 100萬單位
碳酸氫鈉 20.0g
Hepes 23.9g
去離子水加至 10000ml
除青霉素、鏈霉素外，其余各成分溶于蒸餾水中，調(diào)pH至7.0～7.2，115℃壓力蒸汽**20min備用。臨用前加入無菌青霉素、鏈霉素溶液。
20.人**細(xì)胞完全培養(yǎng)基
在人**細(xì)胞維持培養(yǎng)基中加入10%無菌小牛血清。
21.血瓊脂培養(yǎng)基
營養(yǎng)瓊脂 100ml
脫纖維羊血(或兔血) 10ml
將營養(yǎng)瓊脂加熱熔化待冷至50℃左右，以無菌操作將10ml 脫纖維血加入后搖勻，倒平皿置冰箱備用。
22.霉菌培養(yǎng)基
胨 5g
葡萄糖 10g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈉 5.0g
硫酸鎂 0.5g
蒸餾水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成份加入蒸餾水中，微溫溶解后，調(diào) pH 至6.0 ，煮沸，加入葡萄糖溶液后，搖勻，濾清，調(diào) pH 至 5.6～6.0，分裝于 115 ℃壓力蒸汽**30min。
23. SCDLP液體培養(yǎng)基
酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
葡萄糖 2.5g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 2.5g
卵磷脂 1g
吐溫80 7g
蒸餾水 1000ml
將各種成份混合(如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加熱溶解后，調(diào)pH 至 7.2～7.3，分裝于121℃壓力蒸汽**20min，搖勻，冷至 25℃使用。
24.伊紅亞甲藍(lán)培養(yǎng)基
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸二氫鉀 2g
2%伊紅溶液 2ml
0.65%亞甲藍(lán)溶液 1ml
瓊 脂 17g
蒸餾水 1000ml
將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 至 7.1，分裝于121℃壓力蒸汽**20min。臨用時，以無菌操作加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至 50℃時，加入伊紅和亞甲藍(lán)溶液搖勻，倒平皿置４℃冰箱備用。
25. 0.5% 葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
胨 10g
氯化鈉 5g
葡萄糖 5g
肉浸液 1000ml
取胨與氯化鈉加入肉浸液內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)pH 至弱堿性，煮沸、加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào) pH 至7.0～7.4，分裝，于115℃壓力蒸汽**30min。
26. 甘露醇培養(yǎng)基
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 5g
甘露醇 10g
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12ml
蒸餾水 1000ml
將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加入蒸餾水中，加熱溶解，調(diào) pH 至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚藍(lán)混勻后，分裝，于 115℃壓力蒸汽**20min。
27. 乳糖膽鹽發(fā)酵管
蛋白胨 20g
豬膽鹽(或牛，羊膽鹽) 5g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸餾水 1000ml
將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 至 7.4，加入0.04% 溴甲酚紫水溶液，分裝(每管10ml)，并放入一個小倒管，于 115℃壓力蒸汽**15min。
28. 乳糖發(fā)酵管
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸餾水 1000ml
將蛋白胨及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH 至 7.4，加入0.04% 溴甲酚紫水溶液，分裝(每管10ml)，并放入一個小倒管，于 115℃壓力蒸汽**15min。
29．1%莧菜紅
莧菜紅 1%
西曲溴胺 0.05%
30．MEA培養(yǎng)基
麥芽浸膏 30g
大豆蛋白胨 3g
瓊脂 15g
雙蒸水加至 1000ml
將上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后無菌調(diào)pH至5.6±0.2備用。
31．MEB肉湯
麥芽浸膏 20g
雙蒸水加至 1000ml
將上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后無菌調(diào)pH至6.9±0.2備用。
32．注意事項
(1)雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分為乳糖膽鹽發(fā)酵管的2 倍；3倍濃縮乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分為乳糖膽鹽發(fā)酵管的3倍。
(2)配制培養(yǎng)基的容器不宜用銅鍋或鐵鍋，以免影響**生長。
(3)培養(yǎng)基用的試管口和三角燒瓶口應(yīng)用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮紙包好。
(4)試劑與培養(yǎng)基配制好后應(yīng)置清潔處保存，常溫下不超過1 個月。
