植物常量元素的測定                                 

氮（N）、磷（N、鉀（K）是植物營養(yǎng)的三大要素，植物對氮的需要量*大，也*容易缺乏，其次是磷、鉀。因此，植物氮、磷、鉀含量的測定是植物營養(yǎng)研究中*普通的常規(guī)分析項目。例如在診斷植物氮營養(yǎng)水平和土壤供氮狀況、了解植物從土壤攝取氮的數(shù)量、施用氮肥效應(yīng)、植物吸收氮與其他營養(yǎng)元素之間的關(guān)系以及制訂植物氮營養(yǎng)診斷指標(biāo)時，都要測定植物全株或某些部位器官（敏感部位器官）中氮的含量。

植物的含氮（N）量約為0.3～5％干物重，磷（P）含量一般為0.05～0.5％，鉀（K）量一般為1～5％。N、P、K含量因植物種類、器官、生育期和施肥管理水平不同而異，如大豆籽粒含氮量為5.36％，莖稈為1.75％；小麥籽粒含氮2.2～2.5％，莖稈只有0.5％左右；水稻籽粒含氮1.31％，莖稈0.51％。植物發(fā)育階段不同含氮量也經(jīng)常發(fā)生變化。這也說明在對不同植物進(jìn)行取樣測定以及制訂氮、磷、鉀營養(yǎng)豐缺診斷指標(biāo)時，要注明植物生育期、組織部位，只有在相同情況下測定結(jié)果才有比較意義，對指導(dǎo)植物施肥才有參考價值。同樣，在應(yīng)用各種作物營養(yǎng)診斷指標(biāo)時，也僅供解釋分析結(jié)果時參考之用。

3.1植物全氮的測定

植物全氮的測定包括樣品分解和待測液中氮的定量。分解植物樣品的方法通常采用開氏法，即用H₂SO₄-混合加速劑（KSO₄＋CuSO₄十Se粉）或氧化劑如H₂SO₄-HClO₄、H₂SO₄-H₂O₂消煮分解樣品中有機物和有機含氮化合物，使其轉(zhuǎn)化為無機銨鹽。溶液中氮（NH₄⁺-N）的定量方法有蒸餾法、擴散法和比色法。其中以H₂SO₄-混合加速劑-蒸餾法被公認(rèn)為定氮的標(biāo)準(zhǔn)法。由于植物組織中有機質(zhì)的結(jié)構(gòu)比較簡單，易于分解，H₂SO₄-H₂O₂消煮分解法用得*多。

上述消煮和定氮的方法只能測得植物樣品中的有機態(tài)氮和銨態(tài)氮，不包括硝態(tài)氮。對于某些含硝態(tài)氮較高的旱作植物樣品，則需在消煮前先用水楊酸。濃H₂SO₄將樣品中的硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為硝基水楊酸，再用Na₂S₂O₃或鋅粉把硝基水楊酸還原為氨基水楊酸，然后用H₂SO₄-混合加速劑消煮，將全部有機氮（包括氨基水楊酸）轉(zhuǎn)化為銨鹽?？蛇x用蒸餾法或擴散法測定氮。也可以用鉻粒在酸性條件下將樣品中的NO₃^--N還原為NH₄⁺-N，然后用開氏法消煮測定。操作步驟見有機肥料分析中的全氮的測定。

H₂SO₄-H₂O₂消煮-靛酚藍(lán)比色法

方法原理 植物中的氮、磷是以有機態(tài)為主，鉀則以離于態(tài)存在。用濃H₂SO₄-H₂O₂氧化劑消煮植物樣品時，其中的有機物經(jīng)脫水碳化、氧化分解，變成CO₂和H₂O，使有機氮和磷轉(zhuǎn)化為銨鹽和磷酸鹽，可在同一份消煮液中分別測定全氮、磷、鉀。該消煮液對于蒸餾、擴散和比色等定氮方法均適用。

消煮液中的氨在堿性條件下（pH10.5～11.7）與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍(lán)，在0.05～0．5mg·L^-1 N范圍內(nèi)，藍(lán)色深淺與NH₄⁺-N含量成正比，可用比色法測定。生成靛酚藍(lán)的反應(yīng)過程較為復(fù)雜，主要反應(yīng)式如下：

（1）  NH₃  +  NaOC1   →   NH₂Cl +  NaOH

         （次氯酸鈉）    （氯胺）

（2）  NH₂Cl  +  HOC₆H₅  +  NaOH →  HOC₆H₄NH₂ + NaC1 + H₂O

                 （苯酚）          （對-氨基苯酚）

（3） HOC₆H₄NH₂  +   NaOC1 →   OC₆H₄NH  +  NaC1 + H₂O

                                （對-苯醌亞胺）

（4） OC₆H₄NH   +  NaOC1  → OC₆H₄NCl

                                （對-苯醌亞胺）

（5） OC₆H₄NCl  +  HOC₆H₅  + 2NaOH  →  OC₆H₄N C₆H₄Ona  +  NaC1 + H₂O

                                          （靛酚藍(lán)染料）

苯酚溶液中的硝普鈉［硝基鐵氰化鈉］是此反應(yīng)的催化劑，能加速顯色，增強藍(lán)色及其穩(wěn)定性，在室溫20°C左右時需放置1h后比色，完全顯色約需2～3h。生成的藍(lán)色很穩(wěn)定，24h內(nèi)吸收值無顯著變化。在波長625nm處測吸收值。試液中如有干擾的金屬離子，可用EDTA鈉鹽等螫合劑掩蔽。此法優(yōu)點是比色液是真溶液，藍(lán)色穩(wěn)定，再現(xiàn)性較高，適于大批樣品及連續(xù)流動自動分析。靈敏度比納氏比色法高約6倍。其缺點是顯色時間較長，顯色試劑不穩(wěn)定（須冷藏或當(dāng)天配制），顯色條件如pH等須控制好，稀釋倍數(shù)大時，誤差亦增大，故必須嚴(yán)謹(jǐn)操作。

操作步驟

H₂SO₄-H₂O₂消煮 稱取烘干、磨碎（0.25 mm）植物樣品0.3000～0.5000g，置于50 mL開氏瓶（或消煮管）中（勿將樣品粘附在瓶頸上）。先滴入少些水濕潤樣品，然后加8mL濃H₂SO₄，輕輕搖勻（*好放置過夜），瓶口放一彎頸小漏斗，在電爐（或消煮爐）上先文火消煮，待H₂SO₄分解冒大量白煙后再升高溫度，當(dāng)溶液呈均勻的棕黑色時取下。稍冷后加10滴H₂O₂，搖勻，再加熱至微沸，消煮約5min，取下，稍冷后，重復(fù)加H₂O₂5～10滴，再消煮。如此重復(fù)共3～5次，每次添加的H₂O₂量應(yīng)逐次減少，消煮到溶液呈無色或清亮后，再加熱約5～10min，以除盡剩余的H₂O₂（否則會影響N、P比色測定）。取下，冷卻。用少量水沖洗彎頸漏斗，洗液流入開氏瓶。將消煮液無損地洗人100mL容量瓶中，用水定容，搖勻，過濾或放置澄清后供氮、磷、鉀的測定（待測液）。

靛酚藍(lán)比色  將待測液用水準(zhǔn)確稀釋10倍，吸取稀釋后的溶液1.00mL（含NH₄⁺-N2.5～25mg）于50mL容量瓶中，加入1mL EDTA-甲基紅溶液，用0.3moll^-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至pH6左右（即甲基紅由紅色變?yōu)辄S色），再依次加入5mL酚溶液和5 mL次氯酸鈉溶液，搖勻，用水定容。1h后，用1cm光徑的比色杯在625nm波長處比色，用空白試驗溶液調(diào)節(jié)儀器吸收值的零點。

工作曲線繪制  配制NH₄⁺-N標(biāo)準(zhǔn)液：0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg L^-1（50mL容量瓶中各加1mL稀釋10倍的空白消煮溶液，同上操作。調(diào)節(jié)溶液pH及顯色，測定吸收值后繪制工作曲線。

結(jié)果計算

植物全氮含量（N %）= C*V*k/m*100

式中：

C：測得顯色液中氮的濃度，mgL^-1；V：顯色液體積，mL；k：分取倍數(shù)；m：烘干樣品質(zhì)量，g。

3.2植物全磷的測定

植物樣品經(jīng)H₂SO₄-H₂O₂消煮后，待測液中磷通常都選用鉬銻抗比色法（鉬藍(lán)法）或釩鉬黃比色法。前法的優(yōu)點是靈敏度高，簡便、快速、準(zhǔn)確。鉬黃法的靈敏度雖比鉬藍(lán)法較低，但由于其顯色濃度范圍及允許酸度范圍都較寬，對于含磷量較高（0.2％P以上）的植物和肥料等樣品宜選用此怯。含磷量低時以選用鉬銻抗法更為合適。

釩鉬黃比色法

方法原理 待測液中的正磷酸與偏釩酸和鉬酸在酸性條件下能生成黃色的三元雜多酸（釩鉬磷酸）。溶液黃色的深度與磷含量成正比，可用比色法定量磷。此法的優(yōu)點是顯色快，黃色很穩(wěn)定，在24h內(nèi)無顯著變化；要求顯色酸度范圍很寬，極限是0.04～1.6 mol 1^-1，*好是0.05～1.0 mol 1^-1。在HNO₃、HC1、HClO₄、H₂SO₄等介質(zhì)中都可適用；干擾離于少，特別是Fe³⁺和Si的允許存在量遠(yuǎn)高于鉬藍(lán)法；操作簡便快速，準(zhǔn)確度和重復(fù)性較高，相對誤差為1～3％；適測范圍廣，約為1 ～20mg 1^-1P。根據(jù)現(xiàn)色液P濃度（mg 1^-1）分別選擇吸收波長（nm）：400 （0.25～5.5）、440（2.0～15）、470（4.0～17）、490（7.0～20）。

操作步驟

吸取待測液10.00mL放人50mL容量瓶中，加2滴二硝基酚指示劑，用6mol1^-1氫氧化鈉溶液中和至剛呈微黃色，準(zhǔn)確加入10.00mL釩鉬酸銨溶液，用水定容。同時做空白試驗，15min后，在分光光度計上波長450nm處和1cm光徑的比色杯進(jìn)行比色測定，以空白溶液調(diào)節(jié)吸收值的零點。

工作曲線繪制  配制P標(biāo)準(zhǔn)液：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15mg·L^-1，同待測液一樣操作。測定吸收值后繪制工作曲線。

結(jié)果計算

植物全磷含量（P %）= C*V*k/m*100

式中：

C：測得顯色液中P的濃度，mg L^-1；V：顯色液體積，mL；k：分取倍數(shù)；m：烘干樣品質(zhì)量，g。

3.3植物全鉀的測定

植物中的鉀是以離子態(tài)存在，因此樣品處理就比較簡單，當(dāng)只需測定植物樣品中的鉀（和鈉）時，可采用簡易的乙酸銨溶液、鹽酸溶液、或用水煮沸提取，直接用火焰光度計測定是*為快速方便的方法，替代了繁瑣的灰化手續(xù)，測定結(jié)果與用濕法消煮植物樣品的方法相同。但在實際工作中，一般是N、P、K一起測定的，所以大多采用H₂SO₄-H₂O₂一次消煮樣品供N、P、K測定。也可用干灰化法或其他濕灰化法分解樣品，供P、K、Ca、Mg等測定，但這些分解方法制備的待測液不能測N。

測定待測液中鉀，一般都用簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的火焰光度計法。也可以用精度較高的四苯硼重量法和四苯硼容量法，但因植物消煮液中銨鹽的相對量較高，必須分離或掩蔽，以及要沉淀，過濾洗滌、稱重（或滴定）等繁瑣操作而很少使用。鉀離于選擇電極法和電導(dǎo)法，由于需要一定儀器設(shè)備也較少使用。有條件的實驗室還可用比較先進(jìn)的原子吸收分光光度計或等離子體原子發(fā)射光譜儀測定鉀。這里選用目前廣泛使用的H₂SO₄-H₂O₂，消煮植物樣品，火焰光度計法測定鉀。

方法原理 （見土壤全鉀測定）。

操作步驟

吸取待測液5.00mL于25 mL容量瓶中，用水定容（含K10～50 mg l^-1）后測定。

工作曲線繪制  配制K標(biāo)準(zhǔn)液：0、5.0、10、20、30、40、50mg L^-1，同待測液一樣操作（其中各加5.00 mL空白消煮液）。測定后繪制工作曲線。

結(jié)果計算

植物中全鉀含量（K %）= C*V*k/m*100

式中：

C：測定液中K的濃度，mg L^-1；V：測讀液體積，mL；k：分取倍數(shù)；m：烘干樣品質(zhì)量，g。

§4 植物鈣、鎂、硫及微量元素分析

植物生長發(fā)育所必需的大量營養(yǎng)元素中，需要量僅次于氮、磷、鉀的是鈣、鎂、硫3種元素。植物需要相當(dāng)數(shù)量的鈣、鎂、硫元素才能維持其正常的生長發(fā)育。隨著作物產(chǎn)量水平的不斷提高，作物正常代謝所需的這3種元素的數(shù)量也在增加。在含鈣較少的酸性土壤及砂質(zhì)土壤上種植需鈣較多的花生、蔬菜及果樹時，常常出現(xiàn)植物缺鈣現(xiàn)象。在濕潤地區(qū)高度淋溶的酸性土、砂質(zhì)土以及在鎂供應(yīng)不足的土壤而又大量施用氮和鉀肥時，植物容易產(chǎn)生缺鎂。在我國南方的一些丘陵山區(qū)，特別是冷浸性低產(chǎn)田上的作物容易出現(xiàn)缺硫。因此，植物的鈣、鎂、硫營養(yǎng)及營養(yǎng)診斷越來越受到人們的重視。而進(jìn)行植物鈣、鎂、硫營養(yǎng)診斷則常常需要分析植物的鈣、鎂、硫含量。

植物干物質(zhì)中含鈣（Ca）量為0.5～3％。一般豆科植物、蔬菜含鈣量較多，而禾谷類植物等需鈣較少。從植物器官看，一般莖葉含鈣較多，果實、籽粒及根中含量較少。植物體內(nèi)含鎂（Mg）量約為干物質(zhì)的0.05～0.7％。通常，豆科植物的含鎂量為禾本科植物的2～3倍。植物含硫（S）量為干重的0.1～0.5％。十字花科、百合科、豆科等植物需硫較多，而禾本科植物需硫較少。

硼、鉬、鐵、錳、銅、鋅是植物必需的微量營養(yǎng)元素，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中起重要的作用。我國酸性土壤尤其是紅、黃壤上普遍缺硼。缺硼油菜可以導(dǎo)致顆粒無收。缺鉬牧草或牧草中鉬含量過高能使牛發(fā)生缺鉬或鉬毒病。植物缺鐵、缺錳往往發(fā)生在堿性、石灰性土壤上，而鐵、錳中毒多發(fā)生在酸性淹水土壤及廠礦附近的受重金屬污染的土壤上。植物缺鋅比較普遍，往往發(fā)生在堿性、石灰性土壤上。在風(fēng)化、淋溶嚴(yán)重的紅、黃壤上的果樹也常出現(xiàn)缺鋅。在富含有機質(zhì)的土壤和某些堿性、石灰性土壤及風(fēng)化、淋溶嚴(yán)重的紅、黃壤上，植物可能會缺銅。但是，施肥不當(dāng)或大量施用含微量營養(yǎng)元素，包括重金屬（銅、鋅既是植物必需的微量營養(yǎng)元素，也是重金屬元素）等污染元素，如鎘、鉛、砷、銅、鋅，的有機肥（如農(nóng)用垃圾、淤泥、工廠廢棄物等）、某些不合格的磷肥和含磷復(fù)混肥等，以及使用某些含重金屬的農(nóng)藥，在改善農(nóng)作物生長和提高產(chǎn)量的同時，這些元素在土壤或農(nóng)產(chǎn)品中就有可能過量積累，污染土壤和環(huán)境、威脅人體健康。

因此，植物中微量營養(yǎng)元素的分析測定包括植物必需的微量營養(yǎng)元素，也應(yīng)有重金屬等污染元素監(jiān)測。

通常植物中微量營養(yǎng)元素的分析測定，首先是將植物樣品經(jīng)干灰化法或濕灰化法，制成待測液，然后可以采用比色法、AAS、ICP等方法測定植物鈣、鎂、硫及微量元素的全量。

干灰化法是把植物樣品在550°C下干灰化，然后用稀HCl溶解，*后測定溶液中各元素的含量。干灰化法測定植物硫全量包括鹽熔融法（加碳酸氫鈉氧化銀法；過氧化鈉法；硝酸鎂法等）與氧瓶燃燒法，操作比較繁瑣。

濕灰化法一般是用HNO₃、HNO₃-HClO₄、HNO₃-HClO₄-H₂SO₄等消煮植物樣品，*后定量消煮液中各元素的含量含量。還可以采用鹽酸溶液1moll^-1HCl浸提后測定。

現(xiàn)在，待測液中的各元素多采用AAS或ICP方法測定，硼和硫多采用比色法（比濁法）或ICP方法測定。

硼是植物必需的微量營養(yǎng)元素之一，為了維持正常的生理代謝活動，植物體內(nèi)需要有一定的含硼量。對于一定植物來說，硼含量的缺乏與過剩之間變幅較小，當(dāng)含量低于或高于一定水平時就會影響植物生長。如水稻體內(nèi)含硼（B）量1mg kg^-1視為適宜，10 mgkg^-1就發(fā)生中毒。植物含硼（B）量一般為2～95 mg kg^-1，雙子葉植物含硼量（20～60 mg kg^-1）通常高于單子葉植物（6 ～18 mg kg^-1），而蝶形花科和十字花科含硼量則更高；同一植物的不同部位含硼量也變異很大，一般以葉片含量*高，并主要集中在葉尖和葉緣。所以不同時間采樣分析，應(yīng)特別注意采樣部位的一致性，其分析結(jié)果才有比較意義。

植物葉片的含硼量基本上能反映植物對硼的需要，因此可以根據(jù)它來判斷植物是否缺 硼或中毒。一般植物葉片的含硼量低于15 mgkg^-1時，可能缺硼；15～100 mg kg^-1為正常；超過200 mgkg^-1時，則有可能發(fā)生硼中毒。此外，Ca／B比也能反映植物的硼營養(yǎng)狀況，如油菜（抽苔期）Ca／B＞200時缺硼，50時～20時正常；甜菜）100和大豆>50時缺硼。

植物樣品經(jīng)干灰化后，用稀HCI溶解灰分，溶液中硼的定量有比色法和儀器分析法。比色測定硼的顯色劑，早期有醌茜素、胭脂紅（又稱洋紅）、四羥基蒽醌等都是在濃H₂SO₄溶液中脫水顯色，操作不方便，具有危險性，現(xiàn)在已不用。60年代后采用較多的是姜黃素（curcumine）法，靈敏度較高（1.6 x 10^-4mgl^-1 cm^-1B，檢測下限低（0.0021 mgl^-1B），但需經(jīng)蒸干脫水顯色，費時較長，對測定條件要求嚴(yán)格，不適于自動化分析。次甲基藍(lán)法靈敏度高，但空白值亦較高。甲亞胺（Azomethine-H）法在水溶液中顯色，操作方便，顯色穩(wěn)定，適于大批樣品及自動化分析；但靈敏度較低（2.2 x 10^-3mg l^-1cm^-1B），干擾因素較多，需加入EDTA掩蔽劑。ICP法快速、方便、準(zhǔn)確。

鉬是已知植物必需的營養(yǎng)元素中需要量*少的一個，但在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上是應(yīng)用*早的一種微量元素。在各種植物中以豆科和十字花科植物對鉬肥的反應(yīng)*好。測定植物中的鉬含量可以了解土壤的供鉬狀況和植物對鉬的吸收、積累和分布情況，而且還能在植物尚無缺素或毒害癥狀出現(xiàn)之前及早發(fā)現(xiàn)問題，及早采取措施進(jìn)行防治。植物的含鉬（Mo）量變異極大，從0.1～300mg kg^-1（干重）。一般植物的含鉬量為0.1～2.0mg kg^-1，低于0.1mgkg^-1缺鉬，豆類植物低于0.4 mgkg^-1缺鉬。植物的不同部位含鉬量不同，葉片含鉬量比莖多幾倍，豆科植物種子中的含鉬量比莖葉高。種子中的含鉬量有時也可用作預(yù)測植物對施鉬肥的反應(yīng)，例如豌豆種子鉬0.17 mg kg^-1時，對鉬肥有反應(yīng)；0.66 mgkg^-1時，施鉬肥無反應(yīng)。植物含鉬的致毒量差異很大，有的超過100 mgkg^-1也無中毒癥狀，但在牧草中鉬含量超過15 mgkg^-1時，能使牛發(fā)生鉬毒病。

在比色法中*常用的是KCNS法，該法靈敏度較高，測定范圍在0.1～2mg l^-1，極限可測0.04～3 mg l^-1鉬，但對顯色條件要求嚴(yán)格。二硫酚法也可用于鉬的比色測定，但銅和鐵均有干擾，必須先經(jīng)分離后再用二硫酚顯色，操作較繁，所以目前仍以采用KCNS法較多。近年來，極譜法、AAS、ICP等方法測定鉬，精密度高，檢出限低、動態(tài)范圍寬。

植物含錳量的變化幅度比其他微量元素要大，植物中錳（Mn）的正常含量范圍力20～50mg kg^-1，小于20 mgkg^-1為缺乏，大于1000 mgkg^-1可能發(fā)生錳毒害。但水稻對錳（Mn）的忍耐力較強，即使高達(dá)2500 mgkg^-1時仍能正常生長；茶樹葉內(nèi)錳（Mn）的濃度高達(dá)數(shù)千mgkg^-1時，仍無異常癥狀。植物含錳量與土壤pH值有密切關(guān)系，酸性土壤上植物含錳量較高，約200～500 mg kg^-1，而鹽漬土和鈣質(zhì)土上的植物含錳量都低于100 mgkg^-1，所以缺錳往往發(fā)生在堿性土壤，而錳中毒多發(fā)生在酸性土壤及廠礦附近的受重金屬污染的土壤上。對缺錳敏感的作物主要有：燕麥、大麥、甜蘋、**、馬鈴薯、柑桔、蘋果；其次是小麥、亞麻、蠶豆、豌豆和菜豆等。故有必要測定植物中的錳，以了解其錳營養(yǎng)水平，及時采取防治措施，促使植物正常生長。

錳主要存在于植物體的葉和莖中，種子含錳量很少。一般認(rèn)為以植物葉片的干物質(zhì)含錳（Mn）量作為指標(biāo)較好，如小麥（孕穗期）葉片＜25 mgkg^-1，大豆、番前、黃瓜的葉片＜10 mg kg^-1，甜菜、**、馬鈴薯等葉片＜5 mgkg^-1為缺錳。

植物樣品通常采用濕灰化法（硝酸、硝酸-硫酸-高氯酸或硝酸-高氯酸，或硫酸-過氧化氫消煮）或干灰化法進(jìn)行分解。近年來，人們在用稀HCl浸提植物樣品，測定浸出液中Cu、Zn、Fe、Mn、B、Mo等，以取代干、濕灰化法方面作了大量比較試驗，獲得良好結(jié)果。

溶液中錳的測定，一般都用AAS、 ICP直接進(jìn)行測定，它們法快速、簡便、準(zhǔn)確，已在土壤和植物微量元素分析中廣泛應(yīng)用。

植物體中全鐵（Fe）含量約為50～250 mg kg^-1（干物重），一般低于50 mgkg^-1時植物可能缺鐵。桃、李、杏等果樹和其他林木需鐵較多，豆科植物、高梁和甜菜含鐵也較高。葉片分析是診斷植物鐵營養(yǎng)失調(diào)*常用的方法，對果樹作物特別有用。但一些研究表明，植物全鐵含量作為植物缺鐵的診斷指標(biāo)有時不很正確。而與稀酸提取的活性鐵（用1 mol l^-1 HCl提取）有良好的相關(guān)性，能很好地用于診斷植物是否缺鐵。

植物對鐵的吸收和利用與其他元素的比享有密切關(guān)系。如大豆葉片正常的Fe／Mn比為1.5～1.6，小于1.5時發(fā)生缺鐵或Mn過剩癥，大于1.6則發(fā)生缺錳或鐵過剩癥。正常大豆的P/Fe比為32～35，失綠葉片P／Fe比為59～68；正常大豆的Fe／N比（mg Fe比gN）為3.2～4.7，而失綠葉片為1.7。因此，在測定植物鐵含量時，如能結(jié)合分析鐵與其他相關(guān)元素的比率，就可以比較**正確地反映植物鐵營養(yǎng)狀況。

植物對銅的吸收很少，大多數(shù)植物的含銅（Cu）量為5～30 mg kg^-1。葉片分析是診斷植物銅營養(yǎng)失調(diào)*常用的方法，植物缺銅首先出現(xiàn)在幼葉和繁殖器官，固此測定幼葉中的銅含量能較好反映植物缺銅與否。在進(jìn)行植物銅營養(yǎng)診斷時，必須同時考慮土壤有機質(zhì)含量，因為有機質(zhì)含量高的土壤如泥炭土、腐泥土上，植物含銅（Cu）在4～5 mg kg^-1時，往往會發(fā)生缺Cu癥狀；而在礦質(zhì)土上，這樣的含銅量的植物卻生長正常。

植物缺鋅比較普遍，在我國的濱海地帶，石灰性土壤、黃淮沖積土以及河谷盆地的石灰性紫色土地區(qū)，種植的玉米、小麥、水稻、柑桔、蘋果等作物上都有缺鋅癥狀發(fā)生。植物的含鋅（Zn）量較低，一般為10 ～100mg kg^-1（干重）。因植物種類、生長階段、組織部位、土壤性質(zhì)、氣候條件、施用鋅肥和含鋅農(nóng)藥等因素的不同，都會影響植物的含鋅量。植物葉片全鋅量與缺鋅癥狀有良好關(guān)系，大多數(shù)作物缺鋅的臨界值為10～20 mg kg^-1Zn。有時僅憑植物含鋅量不易正確評價植物鋅的豐缺狀況，固為植物含磷量的不同，會影響植物對鋅的需求量不同。一些生長正常作物的磷鋅比（花期取樣測定）為：小麥140，大豆90，甜菜110，蘇丹草125。因此，在測定植物含鋅量的同時，如能測定植物的磷鋅比率，會得到比較可靠的評價結(jié)果。

干灰化-AAS法

方法原理 將植物樣品灼燒，使有機質(zhì)氧化成CO₂和H₂O等揮失，剩下的為Ca、Mg等不可燃的灰分元素的氧化物。然后用稀HCl溶解灰分。灼燒的溫度以525±25°C為宜，不可過高或的燒大急速。溫度太高會引起Na、K的氯化物揮發(fā)損失，而且Na、K的磷酸鹽和硅酸鹽也易熔融而把炭粒包藏起來不易燃盡；灼燒太急速也會使微粒飛失?；曳纸?jīng)稀鹽酸溶解后，可用AAS測定Ca、Mg和其他微量元素（除硼外）。

操作步驟

稱取烘干植物樣品（過1mm篩）2.000～3.000 g 于30mL瓷坩堝中，加1～2mL95％乙醇溶液，使樣品濕潤。然后進(jìn)行預(yù)灰化處理，樣品經(jīng)預(yù)灰化后放入高溫箱式電爐中，加熱到525°C左右，保持約1h，燒至灰分近于白色為止。然后降溫至200°C以下，取出坩堝，冷卻至室溫后用少量水濕潤灰分，分次滴加少量稀鹽酸溶液，慎防灰分飛濺損失，待作用緩和后，添加稀鹽酸溶液至約20mL，加熱至沸，使殘渣溶解。趁熱過濾，并用熱水洗坩堝及殘余物數(shù)次。濾液盛于100mL容量瓶中，冷卻后用水定容。此為含鹽酸的待測液。待測液用AAS測定（參見土壤分析）。

HNO₃消煮-ICP法

方法原理 用HNO₃消煮植物樣品，氧化有機物，使Ca、Mg、P及其它微量元素轉(zhuǎn)化為離子態(tài)，然后測定消煮液中Ca、Mg及其它元素含量。消煮時HNO₃，具有強的氧化力，使有機物被氧化分解成簡單的可溶性化合物，二氧化硅則脫水沉淀。此消煮液可供ICP測定P、K、Ca、Mg、S和其他微量元素（包括硼）。

操作步驟

稱0.3000～0.5000 g植物樣品（過0.5mm篩）于消煮管中，加入濃HNO₃4mL，管口用塑料薄膜封上，放置過夜。然后除去塑料薄膜，將消煮管放入消煮器中加熱至140°C消煮至約2mL。若消煮液尚渾濁，則再加入濃HNO₃2mL，繼續(xù)消煮。如此反復(fù)，直至消煮液澄清、透明或只剩下淡淡的顏色為止。同時做空白。消煮液中各元素用ICP測定。

甲亞胺比色法測硼

方法原理 植物樣品用干灰化法分解，稀HCl溶解灰分，溶液中的Fe、Ca、Mg、Si等加飽和BaCO₃溶液分離除去。濾液中硼用甲亞胺比色法測定。其原理見土壤全硼的測定。

操作步驟

1. 干灰化 稱取烘干磨碎（0.5 mm）的植物樣品0.500～1.000 g ，置于石英坩堝（或瓷坩堝）中，在電爐上加熱炭化，至不冒煙時，移入高溫電爐內(nèi)500oC灼燒2～3h。冷卻后用10～20mLHCl（1：1）溶解灰分，加水至約20 mL，小心加飽和BaCO₃溶液至沉淀產(chǎn)生，再多加1～2滴，移入50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，用干濾紙過濾于干燥塑料瓶中。

2. 甲亞胺顯色。吸取濾液5.00～10.00mL于25 mL容量瓶中，以下操作步驟按土壤分析。

注意事項

試液中Fe、A1、Si等會影響甲亞胺與B的顯色，用BaCO₃中和，使Fe、A1等呈氫氧化物沉淀，硅酸與鋇形成沉淀而除去。

維生素C-鹽酸溶液一次浸提植物中微量元素的原子吸收分光光度法

測定植物或土壤中微量元素含量的方法，目前廣泛采用的是原子吸收分光光度法（AAS）。法具有靈敏度高、干擾少、準(zhǔn)確、分析速度快等優(yōu)點。但在測定植物中微量元素含量時，常因樣品前處理（高溫于灰化或強酸消煮）方法不同，致使測定結(jié)果有差異。另外，處理植物樣品的速度也遠(yuǎn)不能適應(yīng)AAS法的分析速度。因此，人們試用稀HCl提植物中Cu、Zn、Fe、Mn等金屬元素，以替代常規(guī)的于、濕灰化法。但Fe的提取率均偏低。在80oC維生素C-鹽酸溶液一次浸提液，可以一次性完全提取植物中Cu、Zn、Fe、Mn等，特別是可把Fe完全提取出來。HCl提與AAS匹配，手續(xù)簡捷、操作方便，適于大批量樣品分析。

方法原理 植物樣品在80oC下，用Vc-酸溶液（2moll^-1HCl浸提，浸出液中的Cu、Zn、Fe、Mn元素可直接用原子吸收分光光度法進(jìn)行逐一測定。關(guān)于添加維生素C（Vc）提高HCl對植物中鐵提取率的機理，可能是由于植物體內(nèi)的高價鐵被Vc還原和絡(luò)合，而易被HCl完全浸出。

操作步驟

   1．浸提 稱取1.000 g經(jīng)烘干磨碎（1 mm）的植物樣品于塑料瓶中，加入25.0mL浸提液，蓋好內(nèi)、外瓶蓋，稱取該塑料瓶重量。置于80℃恒溫振蕩器上振蕩2h，再稱該塑料瓶重，用蒸餾水補至原重后過濾，濾液為待測液。

   2．AAS測定 由于植物樣品中的Cu、Zn、Fe、Mn含量一般較低，所以這些元素可以直接用浸出液測定。各元素的測定波長是：Cu324.7nm，Zn 213.8nm，Fe 248.5nm，Mn 279.5nm。同時作空白試驗。

   3．工作曲線 將待測元素混合配制在同一標(biāo)準(zhǔn)溶液中，其中加入與待測液相同量的HCl浸提液。具體操作參見土壤分析。