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薄層層析法測定果醬中苯甲酸、山梨酸的含量
日期：2025-02-08 11:01
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摘要：
薄層層析法測定果醬中苯甲酸、山梨酸的含量
一、原理
先將樣品酸化，然后用乙醚提取苯甲酸和山梨酸。再將提取液濃縮，點樣于聚酰胺板上，經展開、顯色后，并與標準點比較可進行概略定量。
二、試劑
6mol/L HCl(1:1) 乙醚：除去過氧化物
4%NaCl 酸性溶液 無水乙醇
無水硫酸鈉 聚酰胺粉：200目
展開劑：正丁醇：氨水：無水乙醇（7+1+2）
異丙醇：氨水：無水乙醇（7+1+2）
顯色劑：0.04%溴甲酚紫（用50%的乙醇配制，并用0.1mol/L NaOH調至PH=8）
苯甲酸標準液（2mg/mL）：精密稱取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。
山梨酸標準液（2mg/mL）：精密稱取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。
三、儀器
玻璃板（10×18cm） 微量注射器（10uL,20uL） 層析缸 噴霧器 吹風機
四、測定操作
1、樣品處理
稱取25g混合均勻的樣品，置于100mL分液漏斗中加0.5mLHCl酸化，用15、10mL乙醚提取兩次，每次振搖1分鐘，靜置分層后將醚層分出，合并乙醚提取液。用3mL 4%NaCl酸性溶液洗滌兩次，棄去水層，靜置15分鐘，再分離出水層，將乙醚提取液通過無水硫酸鈉移入25mL容量瓶中，加乙醚定容。吸取10.00mL乙醚提取液分兩次置于10ml具塞離心管中，在約40℃水浴上揮干，加入0.1mL乙醇溶解殘渣，備用。
2、聚酰胺薄層板的制備
稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約15mL水，研磨3分鐘，在10×20cm玻璃板上使其均勻即涂成0.25-0.30mm厚的薄層，室溫下干燥1小時，置于烘箱內80℃干燥1小時，取出后置干燥器中備用。
3、點樣
在距薄層板下端2cm的基線上，用微量注射器點1uL、2uL樣品液，同時分別點1uL、2uL苯甲酸、山梨酸標準溶液，點間距1.5cm。
4、展開顯色
將點樣后的薄層板放入預先盛有展開劑的展開槽中，展開槽內壁貼有濾紙，待溶劑前沿上展至10cm,取出揮干，噴顯色劑，斑點黃色，背景藍色。
5、定性與定量
把樣品斑點與標準斑點比較，若與標準斑點同一位置線上出現樣品斑點，說明樣液中存在苯甲酸或山梨酸。然后根據斑點的面積大小及顏色深淺確定樣品點的苯甲酸、山梨酸的含量，再進行計算。
五、計算
樣品中苯甲酸的含量（g/kg）=
(山梨酸)
A——點樣用樣液中苯甲酸（山梨酸）的含量mg
M——稱取的樣品質量g
V1——溶解殘渣時加乙醇體積mL
V2——點樣的體積mL
