文章詳情
膽堿酯酶抑制法測(cè)定有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量
日期：2025-02-08 11:08
瀏覽次數(shù)：3791
摘要：
膽堿酯酶抑制法測(cè)定有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量
(本法參照GB/T 5009·199-2003)
一、原理
有機(jī)磷類(OPS)和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶(AchE)的活性具有很強(qiáng)的抑制作用。向樣品中添加一定量的乙酰(或丁酰)膽堿酯酶，如果樣品中含有上述兩大類農(nóng)藥，即會(huì)對(duì)酶的活性產(chǎn)生抑制作用。當(dāng)向含有農(nóng)藥的樣品中添加底物(碘化硫代乙酰膽堿)和顯色劑(二硫代二硝基苯甲酸)時(shí)，酶由于喪失活性而不能催化底物分解并完成顯色反應(yīng)；相反，如果樣品中不含農(nóng)藥，膽堿酯酶則能催化底物分解并完成顯色反應(yīng)。通過(guò)分光光度計(jì)于412nm波長(zhǎng)下比色，能測(cè)出顏色變化造成的吸光度之差，再通過(guò)吸光度的變化計(jì)算出酶的抑制率。酶的抑制率越大，說(shuō)明樣品中殘留農(nóng)藥的含量越高。
二、試劑
1、磷酸鹽緩沖溶液：3.2gKH2PO4和11.9gK2HPO4配成1000mL，PH8.0。
2、顯色劑：160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。
3、底物：取25.0mg碘化硫代乙酰膽堿，加3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期不超過(guò)2周。
4、膽堿酯酶溶液：稱取0.040g丁酰膽堿酯酶(粉劑)或乙酰膽堿酯酶，加入2mL磷酸鹽緩沖溶液，溶解后低溫保存，1周內(nèi)可用。
三、儀器
1、農(nóng)藥殘留快速測(cè)定儀或分光光度計(jì)。
2、分析天平。
3、恒溫烘箱。
四、測(cè)定步驟
1、取蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm見(jiàn)方的碎片，取樣1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖液振蕩1～2min，倒出提取液，靜置3～5min備用。
2、對(duì)照溶液測(cè)試：先于試管中加入2.5mL緩沖液，再加入0.1mL膽堿酯酶溶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上(每批樣品測(cè)試時(shí)放置時(shí)間應(yīng)一致)。加入0.1mL底物搖勻，此時(shí)檢液開始顯色，應(yīng)立即用1cm比色皿放入農(nóng)藥殘留快速測(cè)定儀(或分光光度計(jì))，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值△A0。
3、樣品溶液測(cè)定：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值△At。
五、結(jié)果計(jì)算與判定
抑制率(%)=[(△A0-△At)/ △A0]×100
式中：
△A0-對(duì)照溶液反應(yīng)3min吸光度變化值；
△At -樣品溶液反應(yīng)3min吸光度變化值。
當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。
本檢驗(yàn)方法陽(yáng)性結(jié)果符合率在80%以上。
