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保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定
日期：2025-02-08 13:53
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摘要：
保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定
（本法參照GB/T5009·171-2003）
一、原理
將25℃時抑制鄰苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定義為一個活力單位。在堿性條件下，鄰苯三酚會發(fā)生自氧化，可根據(jù)SOD抑制鄰苯三酚自氧化能力測定SOD活力。
二、試劑
1、A液：PH8.200.1mol/l三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（內(nèi)含1mmol/LEDTA·2Na）。稱取1.2114g三羥甲基氨基甲烷和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/l鹽酸溶液中，用蒸餾水定溶至100ml。
2、B液：4.5mmol/l鄰苯三酚鹽酸溶液。稱取鄰苯三酚56.7mg溶于少量10mmol/l鹽酸溶液，并定容至100ml。
3、鹽酸溶液：10mmol/l
4、蒸餾水：二重石英蒸餾水。
三、儀器
1、紫外-可見分光光度計；
2、精密酸度計，0.01PH；
3、離心機；
4、10ml比色管；
5、10ml離心管；
6、玻璃乳缽。
四、測定步驟
1、取茶葉樣品1.00g置于研缽中，加入9.0ml蒸餾水研磨5分鐘，移入10ml離心管。用少量蒸餾水沖洗研缽，洗液并入離心管中，加蒸餾水至刻度，經(jīng)4000r/min離心15分鐘，取上清液測定。
2、在25℃左右，于10ml比色管中依次加入A液2.35ml，蒸餾水2.00ml，B液0.15ml。加入B液立即混合并傾入比色皿，分別測定在325nm波長條件下初始時和1Min后吸光度值，二者之差為鄰苯三酚自氧化速率△A325（min-1）為0.060。
3、在25℃左右，于10ml比色管中依次加入20.0ul樣液或酶液，A液2.35ml，蒸餾水2.00ml，B液0.15ml。加入B液立即混合并傾入比色皿，分別測定在325nm波長條件下初始時和1分鐘后吸光度值，二者之差為樣液或酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率△A′325（min-1）。加入樣液或酶液的量使抑制鄰苯三酚自氧化速率為1/2△A′325（min-1），即0.030。
五、計算結(jié)果
SOD活力（u/g）=
式中：
V—加入樣液或酶液的體積，ml
△A325—鄰苯三酚自氧化速率
△A′325—樣液或酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率
D—樣液或酶液的稀釋倍數(shù)
V1—樣液總體積，ml
4.5—反應(yīng)液總體積，ml
m—樣液的質(zhì)量，ml
