3.17.1 前言

3.17.2 熱力**效果的監(jiān)測(cè)方法

3.17.2.1 壓力蒸汽**效果監(jiān)測(cè)方法

1）指示菌株:指示菌株為耐熱的嗜熱脂肪桿菌芽孢(ATCC 7953 或 SSIK 31株)，菌片含菌量為 5.0×10⁵ cfu/片～5.0×10⁶cfu/片，在 121℃±0.5℃條件下，D值為 1.3 min～1.9min，殺滅時(shí)間(KT值)≤19min，存活時(shí)間(ST值)為≥3.9min。

再下排氣壓力蒸汽**器**柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由 3 件平紋長(zhǎng)袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2 塊中手術(shù)巾，1塊大毛巾，30 塊10cm×10cm 8 層紗布敷料包裹成 25cm×30cm×30cm 大小)；預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽**器**柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包（由16條全棉手術(shù)巾每條41cm×66cm，將每條手術(shù)巾的長(zhǎng)邊先折成3層，短邊折成2層然后疊放，作成23cm×23cm×15cm大小的測(cè)試包）；手提壓力蒸汽**器用通氣貯物盒（22cm×13cm×6cm) 代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只**試管內(nèi)(試管口用**牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽**器底部。

3.17.2.2 干熱**效果監(jiān)測(cè)方法

1）檢測(cè)方法:將既能指示溫度又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示劑 3個(gè)～5個(gè)分別放入待**的物品中，并置于**器*難達(dá)到**的部位。經(jīng)一個(gè)**周期后，取出化學(xué)指示劑，據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到**條件。

1）指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC 9372），菌片含菌量為 5.0×10⁵cfu/片～5.0×10⁶cfu/片。其抗力應(yīng)符合以下條件：在溫度 160℃±2℃時(shí)，其D 值為 1.3min～1.9min，存活時(shí)間≥3.9min，死亡時(shí)間≤19min。

2）檢測(cè)方法：將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入**中試管內(nèi)（ 1 片/管）。**器與每層門把手對(duì)角線內(nèi)，外角處放置2個(gè)含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門，經(jīng)一個(gè)**周期后，待溫度降至 80℃時(shí)，加蓋試管帽后取出試管。在無(wú)菌條件下，加入普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5ml/管），以 36℃±1℃培養(yǎng) 48h，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第七日。

3）結(jié)果判定：若每個(gè)指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為**合格，若指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合格，對(duì)難以判定的肉湯管，取 0.1ml 接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用**L棒涂勻，放36℃±1℃培養(yǎng)48h，觀察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長(zhǎng)，若有指示菌生長(zhǎng)，判為**不合格；若無(wú)指示菌生長(zhǎng)，判為**合格。

3.17.3 環(huán)氧乙烷（EO）**效果監(jiān)測(cè)

3.17.3.1 **效果監(jiān)測(cè)

每次**均應(yīng)進(jìn)行程序監(jiān)測(cè)。每個(gè)**物品的外包裝應(yīng)粘貼包外化學(xué)指示膠帶，作為**過(guò)程的標(biāo)志;包內(nèi)放置化學(xué)指示卡，作為**效果的參考。每月應(yīng)做生物監(jiān)測(cè)，移植物必須等生物監(jiān)測(cè)結(jié)果為陰性時(shí)方可使用。具體做法，環(huán)氧乙烷測(cè)試包分挑戰(zhàn)性測(cè)試包和常規(guī)測(cè)試包，前者主要用于對(duì)**器的考核，后者作為平時(shí)的常規(guī)生物監(jiān)測(cè)之用。挑戰(zhàn)性測(cè)試包是將一生物指示劑放于一個(gè)20ml注射器內(nèi)，去掉針頭和針頭套，生物指示劑帶孔的塑料帽應(yīng)朝注射器針頭處，再將注射器芯放在原位(注意不要碰及生物指示物)；另選一**型氣管插管或一個(gè)塑料注射器(內(nèi)含化學(xué)指示卡)，一個(gè)琥珀色乳膠管(25.4cm長(zhǎng)，0.76cm內(nèi)徑，1.6mm管壁厚)和4條全棉清潔手術(shù)巾(46cm×76cm)，每條巾單先折疊成3層，再對(duì)折，即每條巾單形成6層，然后將疊好的巾單從下至上重疊在一起，再將上述物品放于巾單中間層，*后選兩條清潔布或無(wú)紡布包裹，用化學(xué)指示膠帶封扎成一個(gè)測(cè)試包。常規(guī)測(cè)試包的制備方法類似，先將一生物指示劑放于一個(gè)注射器內(nèi)(同前)，再用一條全棉小毛巾兩層包裹，一起放入一剝離式包裝袋內(nèi)。

按照GB 18279-2000 醫(yī)療器械 環(huán)氧乙烷**確認(rèn)和常規(guī)控制附錄 C中C3.1的要求進(jìn)行。

3.17.3.4 生物指示物監(jiān)測(cè)法

3.17.3.5 每次**都應(yīng)進(jìn)行**過(guò)程監(jiān)測(cè)。見3.2.6.5。

3.17.3.6 結(jié)果判定：經(jīng)培養(yǎng)，陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)有菌生長(zhǎng)；監(jiān)測(cè)樣品若連續(xù)培養(yǎng)觀察5天，全部無(wú)菌生長(zhǎng)，可報(bào)告生物指示物培養(yǎng)陰性，**合格。

3.17.3.7 注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用化學(xué)和微生物指示物必須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。

3.17.4 紫外線**效果的監(jiān)測(cè)

3.17.4.1 紫外線燈管輻照度值的測(cè)定

1）紫外線輻照計(jì)測(cè)定法：開啟紫外線燈 5min 后，將測(cè)定波長(zhǎng)為 253.7nm 的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離 1m 的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。

（2）結(jié)果判定:普通 30w 直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度≥90μW/cm²為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度≥70μW/cm² 為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度≥180μW/cm² 為合格。

（3）注意事項(xiàng):測(cè)定時(shí)電壓 220V±５V，溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度＜60％，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期內(nèi)使用；指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。

3.17.4.2 生物監(jiān)測(cè)法

3.17.5 醫(yī)療器械**效果的監(jiān)測(cè)

3.17.5.1 采樣時(shí)間:在**處理后，存放有效期內(nèi)采樣。

3.17.5.2 無(wú)菌檢驗(yàn)

1）洗脫液與培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn):無(wú)菌試驗(yàn)前3d，于需-厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種 1ml 洗脫液，分別置30℃～35℃與20℃～25℃培養(yǎng)72h，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

（2）無(wú)菌操作:取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸入 6 管需-厭氧培養(yǎng)管(其中一管作陽(yáng)性對(duì)照)與4 管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為 15ml/管。

1)取5付注射器，在5ml 洗脫液中反復(fù)抽吸 5次，洗下管內(nèi)**，混和后接種需-厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共6 管，其中 1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)管(共4 管)。接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5ml～10ml注射器為 2ml，20ml～50ml注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為 2ml 以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。

2)手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取 2 件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入 5ml 無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管(共6 管，其中 1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)基(共4 管)。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為 15ml/管。

（3）培養(yǎng):在待檢樣品的需-厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照管液 1:1000 稀釋 1ml，將需-厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管均于 30℃～35℃培養(yǎng) 5d，霉菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于 20℃～25℃培養(yǎng) 7d，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)，如加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 48h～72h 后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在斜面上有無(wú)菌落生長(zhǎng)，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。

（4）結(jié)果判定:陽(yáng)性對(duì)照在24h 內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需-***及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為**合格；如需-***及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試 2次，除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為**不合格。

3.17.5.3 注意事項(xiàng)

（1）送檢時(shí)間不得超過(guò) 6h，若樣品保存于 0℃～4℃，則不得超過(guò)24h。

（2）被采樣本表面積＜100cm²取全部表面；被采樣本表面積≥100cm²，取 100cm²。

本法系利用鱟試劑與**內(nèi)**產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判斷供試品中**內(nèi)**的限量是否符合規(guī)定的一種方法。內(nèi)**的量用內(nèi)**單位（EU）表示。**內(nèi)**國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（以下簡(jiǎn)稱RSE）系自大腸桿菌提取精致得到的內(nèi)**。以**內(nèi)**國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，經(jīng)過(guò)協(xié)作標(biāo)定，使其與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致。RSE用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定**內(nèi)**工作標(biāo)準(zhǔn)品（以下簡(jiǎn)稱CSE）。CSE系經(jīng)RSE為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)定，確定其重量的相當(dāng)效價(jià)。每毫微克（1ng）CSE的效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于 50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。CSE 用于試驗(yàn)中鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及設(shè)置的陽(yáng)性對(duì)照。

1）試驗(yàn)準(zhǔn)備：試驗(yàn)所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)**，常用的方法是250℃干烤至少 1h 或 180℃干烤至少2h，也可用其他適宜的方法。試驗(yàn)所用器皿應(yīng)確證無(wú)吸附**內(nèi)**的作用。試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物的污染。

2）鱟試劑靈敏度復(fù)核：根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值（λ），將RSE或CSE用**內(nèi)**檢查用水（與批號(hào)鱟試劑 24h 不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的**注射用水，以下簡(jiǎn)稱BET水）溶解，在旋渦混合器上混合 15min，然后制備成2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ等 4個(gè)濃度的內(nèi)**標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30s，按“檢查法”項(xiàng)下試驗(yàn)，每一濃度平行做4管，同時(shí)用BET 水做 4管陰性對(duì)照，如*大濃度（2.0λ）4管為陽(yáng)性，*低濃度（0.25λ）4管均為陰性，陰性對(duì)照 4 管均為陰性，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的測(cè)定值（λ_c）。

式中 X 為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列濃度遞減的內(nèi)**溶液中*后一個(gè)呈陽(yáng)性結(jié)果的濃度。

當(dāng)λ_c 在 0.5λ～2.0λ(包括 0.5λ和 2.0λ)時(shí)，方可用于**內(nèi)**檢查，并以λ為該批鱟試劑的靈敏度。每批新的鱟試劑在用于試驗(yàn)前都要進(jìn)行靈敏度的復(fù)核。

鱟試劑靈敏度定義為在本檢查法規(guī)定的條件下能檢測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液中的*低內(nèi)**濃度，用EU/ml 表示。

3）供試品干擾試驗(yàn)：按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項(xiàng)下試驗(yàn)，用 BET 水和未檢出內(nèi)**的供試品溶液或其不超過(guò)*大有效稀釋倍數(shù)（MVD）的稀釋液分別制成含 CSE2.0λ、λ、0.5λ和0.25λ等4種濃度的內(nèi)**溶液。用BET水和供試品溶液或稀釋液制成的每一濃度平行做4管，另取BET水和供試品溶液或稀釋液各做4管陰性對(duì)照。如標(biāo)準(zhǔn)溶液*大濃度（2.0λ）4管均為陽(yáng)性，*低濃度（0.25λ）4 管均為陰性，兩種陰性對(duì)照 8 管均為陰性時(shí)，按下式計(jì)算用BET水制成的內(nèi)**標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(E_s)和用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)**溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(E_t)。

式中X_s 、X_t 分別為用BET水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)**溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值（lg）。

當(dāng) E_t 在 0.5E_s～2.0E_s(包括 0.5E_s 和 2.0E_s)時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，否則需進(jìn)行適當(dāng)處理后重復(fù)試驗(yàn)，或使用更靈敏的鱟試劑，對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋，是排除干擾因素的簡(jiǎn)單有效的方法。每個(gè)品種要求至少對(duì)3個(gè)批號(hào)的供試品進(jìn)行干擾試驗(yàn)，若鱟試劑的來(lái)源、供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時(shí)，須重復(fù)進(jìn)行干擾試驗(yàn)。

L為供試品的**內(nèi)**限值，以 EU/ml 表示，當(dāng)正文中的限值以 EU/mg 或EU/U 表示時(shí)，應(yīng)乘以供試品溶液的濃度，再以所得值代入上式。

4）檢查法：取裝有 0.1ml 鱟試劑溶液的 10mm×75mm試管或 0.1ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓿 6 支，其中2 支加入 0.1ml或 0.2ml 供試品溶液(其稀釋倍數(shù)不得超過(guò)MVD)作為供試品管，2支分別加入 0.1ml 或0.2ml 用 BET水將 CSE 制成的2.0λ和    0.25λ濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)**溶液，1 支加入0.1ml 或 0.2mlBET水作為陰性對(duì)照，1 支加入0.1ml 或 0.2ml供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液(相當(dāng)于用供試品溶液將CSE 制成 2λ濃度的內(nèi)**溶液)作為陽(yáng)性對(duì)照管。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入 37℃±1℃水浴或適宜恒溫器中，保溫 60min±2min。保溫和拿取試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。

5) 結(jié)果判斷: 將試管從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn) 180°時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為(+)；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。供試品 2 管均為（-），應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定。當(dāng)供試品的稀釋倍數(shù)等于 MVD 時(shí)，如 2 管均為（+），應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如兩管中 1 管為（+），1 管為（-），按上述方法復(fù)試，其中供試品管增加為 4 管，供試品 4 管中如有 1 管為（+），即認(rèn)為不符合規(guī)定。若**次試驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于 MVD 而結(jié)果出現(xiàn) 2 管均為（+）或 2管中 1 管為（+），1 管為（-）時(shí)，按同樣方法復(fù)試和判定，復(fù)試時(shí)要求將其稀釋至 MVD 。加入標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)**溶液的 2 管中*大濃度（2.0λ）管應(yīng)為(+)，*低濃度(0.25λ)管應(yīng)為(-)。供試品陽(yáng)性對(duì)照均應(yīng)為（+），陰性對(duì)照均應(yīng)為（-），否則試驗(yàn)無(wú)效。

2）供試家兔：試驗(yàn)用的家兔應(yīng)健康無(wú)傷，體重 1.7 kg～3.0kg，雌兔應(yīng)無(wú)孕。預(yù)測(cè)體溫前 7 日起，即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)。在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異常現(xiàn)象。未經(jīng)使用于熱原檢查的家兔，或供試品判定為符合規(guī)定，但組內(nèi)升溫達(dá)0.6℃的家兔；或供試品判定為不符合規(guī)定，但其組內(nèi)家兔平均升溫未達(dá)0.8℃，且已休息兩周以上的家兔；或三周內(nèi)未曾使用的家兔，均應(yīng)在檢查供試品前3d～7d內(nèi)預(yù)測(cè)體溫，進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)的條件與檢查供試品時(shí)相同，僅不注射藥液，每隔1h測(cè)量體溫 1 次，共測(cè)4 次，4次體溫均在 38.0℃～39.6℃的范圍內(nèi)，且*高*低體溫的差數(shù)不超過(guò) 0.4℃的家兔，方可供熱原檢查用。用于熱原檢查后的家兔，如供試品判定為符合規(guī)定，至少休息2d方可供第 2次檢查用。用于熱原檢查后的家兔，如供試品判定為不符合規(guī)定，且其組內(nèi)家兔平均升溫達(dá)0.8℃或更高時(shí)，則組內(nèi)全部家兔不再使用，每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過(guò)10 次。

3）試驗(yàn)前的準(zhǔn)備：在作熱原檢查前 1d～2d，供試用家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度的環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于5℃，實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)在 17℃～28℃，在試驗(yàn)全部過(guò)程中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，應(yīng)避免噪音干擾。家兔在試驗(yàn)前至少1h 開始停止給食并置于適宜的裝置中，直至試驗(yàn)完畢。家兔體溫應(yīng)使用精密度為±0.1℃的肛溫計(jì)，或其他同樣**的測(cè)溫裝置。肛溫計(jì)插入**的深度和時(shí)間各兔應(yīng)相同，深度一般約為6cm，時(shí)間不得少于1min，每隔30 min～60min測(cè)量體溫 1 次，一般測(cè)量2 次，兩次體溫之差不得超過(guò) 0.2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。當(dāng)日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在38.0℃～39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過(guò) 1℃。

4）試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切和供試品溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱 30min或用 180℃加熱2h，也可用其他適宜的方法除去熱原。

5）檢查法：取適用的家兔 3 只，測(cè)定其正常體溫后 15min 內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s 38℃的供試品溶液，然后每隔 1h 按前法測(cè)量其體溫1 次，共測(cè) 3次，以 3 次體溫中*高一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高度數(shù)。如 3 只家兔中有 1 只體溫升高 0.6℃或 0.6℃以上，或 3 只家兔體溫升高均低于 0.6℃，但升高的總數(shù)達(dá) 1.4℃或 1.4℃以上，應(yīng)另取 5 只家兔復(fù)試，檢查方法同上。

6）結(jié)果判定：在初試 3只家兔中，體溫升高均低于 0.6℃，并且3 只家兔體溫升高總數(shù)低于 1.4℃，或在復(fù)試的5 只家兔中，體溫升高 0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)僅有1 只，并且初試，復(fù)試合并 8 只家兔的體溫升高總數(shù)為 3.5℃或3.5℃以下，均認(rèn)為供試品符合熱原檢查條例規(guī)定。

在初試 3 只家兔中，體溫升高 0.6℃或 0.6℃以上的家兔超過(guò) 1 只，或在復(fù)試的 5 只家兔中，體溫升高 0.6℃或 0.6℃以上的兔數(shù)超過(guò) 1 只，或在初試、復(fù)合并8 只家兔的體溫升高總數(shù)超過(guò) 3.5℃，均認(rèn)為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。

3.17.6 手和皮膚黏膜**效果監(jiān)測(cè)

3.17.6.1 采樣時(shí)間:在**后立即采樣。

3.17.6.2 采樣方法

(1) 手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30cm²)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。

(2) 皮膚粘膜采樣:用 5cm×5cm 的標(biāo)準(zhǔn)**規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。

3.17.6.3 檢測(cè)方法

(1) **總數(shù)檢測(cè):將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，用無(wú)菌吸管吸取 1.0ml 待檢樣品接種于**平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的 45℃～48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂 15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置 36℃±1℃溫箱培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。

 

                                 平板上菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù)

 

(2) 致病菌檢測(cè):按3.17.15的原則執(zhí)行。

3.17.6.4 結(jié)果判定

(1) **洗手

3.17.6.5 注意事項(xiàng)

皮膚粘膜采樣處，若表面不足5cm×5cm 可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。

3.17.7 物品和環(huán)境表面**效果的監(jiān)測(cè)

3.17.7.1 采樣時(shí)間:在**處理后進(jìn)行采樣。

3.17.7.2 采樣方法:用5cm×5cm 的標(biāo)準(zhǔn)**規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積≥100cm²，連續(xù)采樣 4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。

     (1)**總數(shù)檢測(cè):檢測(cè)方法按3.17.6.3（1）執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用 cfu/件表示。

(2) 致病菌檢測(cè):檢測(cè)方法按3.17.15原則執(zhí)行。

(1) 采樣時(shí)間:按 3.17.5.1 執(zhí)行。

(2) 樣本量及處理:按 3.17.5.2(1) 執(zhí)行。

3.17.8 空氣**效果的監(jiān)測(cè)

3.17.8.1 采樣時(shí)間:在**處理后、操作前進(jìn)行采樣。

3.17.8.2 采樣方法：平板暴露法

(1) 布點(diǎn)方法:室內(nèi)面積≤30m²，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積＞30m²，設(shè) 4 角及中央 5 點(diǎn)，4 角的布點(diǎn)部位距墻壁 1m 處。

(2) 采樣方法:將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板(直徑為 9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面 1.5m 采樣時(shí)將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露 5min，蓋好立即送檢。

3.17.8.3 檢測(cè)方法:按照2.1.3要求進(jìn)行。

**總數(shù)（cfu/m³）=50000N/（A × T）

3.17.8.5 注意事項(xiàng)

采樣前，關(guān)好門、窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10min 進(jìn)行采樣。

3.17.9 **液的監(jiān)測(cè)

3.17.9.1 常用**液有效成分測(cè)定

（1）有效氯含量測(cè)定：按2.2.1.2.1 的方法進(jìn)行。

（2）有效碘含量的測(cè)定：按 2.2.1.2.2 的方法進(jìn)行。

上二種**劑的簡(jiǎn)易濃度試紙測(cè)定法按 4.3.5.2 的方法進(jìn)行；水中余氯測(cè)定按 4.3.5.3 的方法進(jìn)行。

（3）戊二醛（C₅H₈O₂）含量的測(cè)定：按2.2.1.2.8的方法進(jìn)行。

（4）過(guò)氧化氫(H₂O₂)濃度的測(cè)定：按2.2.1.2.4的方法進(jìn)行。

（5）過(guò)氧乙酸(C₂H₄O₃)濃度的測(cè)定：按2.2.1.2.3的方法進(jìn)行。

（6）二氧化氯(ClO₂) 含量的測(cè)定：按2.2.1.2.6的方法進(jìn)行。

（7）二溴海因含量測(cè)定：按2.2.1.2.6的方法進(jìn)行。

（8）乙醇含量測(cè)定：按2.2.1.2.10的方法進(jìn)行。

（9）醋酸氯己定(C₂₂H₃0Cl₂N₁₀·2C₂H₄O₂) 含量的測(cè)定：2.2.1.2.11的方法進(jìn)行。

（10）臭氧含量測(cè)定：按2.2.1.2.5的方法進(jìn)行。

（11）苯扎溴銨含量測(cè)定：按2.2.1.2.12的方法進(jìn)行。

3.17.9.2 使用中**液染菌量測(cè)定

(1) 檢測(cè)方法：

1）涂抹法:用無(wú)菌吸管吸取**液1.0ml，加入 9.0ml含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無(wú)菌吸管吸取上述溶液0.2ml，滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時(shí)做2個(gè)平行樣，一平板置20℃培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長(zhǎng)情況，另一個(gè)平板置35℃溫箱培養(yǎng)72h記數(shù)菌落數(shù)，同時(shí)按 3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。

**液染菌量(cfu/ml)＝每個(gè)平板上的菌落數(shù) × 50

2）傾注法：用無(wú)菌吸管吸取**液 1.0ml，加入到9.0ml 含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取 0.5ml 放入2 只**平皿內(nèi)，加入已熔化的 45℃～48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置 20℃培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長(zhǎng)情況;另一個(gè)平板置36℃±1℃培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，同時(shí)按 3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。

**液染菌量(cfu/ml)＝每個(gè)平板上的菌落數(shù) × 20

(2) 結(jié)果判斷:**液染菌量≤100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。

(3) 注意事項(xiàng):采樣后 1h 內(nèi)檢測(cè)。

3.17.10 餐具**效果監(jiān)測(cè)

3.17.10.1 采樣時(shí)間:在**后、使用前進(jìn)行采樣。

3.17.10.2 采樣方法:將2.0cm×2.5cm **濾紙片于無(wú)菌洗脫液中浸濕均勻，貼在食具表面，經(jīng) 5min 取下，每10張濾紙合為一份樣本(相當(dāng)于50cm²采樣面積)，投入含 50ml生理鹽水的100ml 三角燒瓶中，于 4h內(nèi)送檢。

3.17.10.3 檢測(cè)方法

(1) **總數(shù)的檢測(cè):按3.17.6.3.(1)執(zhí)行。

(2) 大腸菌群的檢測(cè):取 1ml 采樣液，加入相應(yīng)的單倍或雙倍乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，置 37℃溫箱培養(yǎng) 24h，若乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，則可報(bào)告大腸菌群陰性。如果有疑慮則進(jìn)行分離培養(yǎng)。

3.11.5.5 紡織品:**總數(shù)≤5cfu/cm²，大腸菌群未檢出。

3.17.10.5 注意事項(xiàng):餐具若用化學(xué)**劑**，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。

3.17.11 衛(wèi)生潔具**效果監(jiān)測(cè)

(1) 采樣時(shí)間:在**后、使用前進(jìn)行采樣。

(2) 采樣方法:便器、尿壺等容器可用沾有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口處，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 5ml 無(wú)菌生理鹽水試管中，立即送檢。

拖把、抹布等物品可用無(wú)菌的方法剪取1cm×3cm，直接投入 5ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水中，立即送檢。

(3)檢測(cè)方法:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，取采樣液按 3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。

3.17.12 內(nèi)鏡****效果的監(jiān)測(cè)

3.17.12.1 采樣時(shí)間:在****后、使用前進(jìn)行采樣。

3.17.12.2 采樣方法:用沾有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的棉拭子，在被檢內(nèi)鏡上從鏡頭至鏡身反復(fù)涂擦，剪去手接觸部位，將棉拭子投入到 5ml含相應(yīng)中和劑的生理鹽水采樣管中，立即送檢。

3.17.12.3 檢測(cè)方法

(2)致病菌檢測(cè):將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打 80 次，按3.17.15原則檢測(cè)致病菌。

3.17.12.4 結(jié)果判定:**后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。

3.17.12.5 注意事項(xiàng):采樣面積按3.17.7.2執(zhí)行。

3.17.13 醫(yī)用污物**效果監(jiān)測(cè)

3.17.13.1 采樣時(shí)間:在**后、清運(yùn)前進(jìn)行采樣。

3.17.13.2 焚化**效果監(jiān)測(cè):可焚化物品的**效果監(jiān)測(cè)，以污物燃燒充分、徹底為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行直接檢查。

3.17.13.3 堿化**效果監(jiān)測(cè):以熟石灰為**劑的堿化**，日常監(jiān)測(cè)以pH為指標(biāo)。**后30min 檢查 pH值，若pH=12，繼續(xù)作用 24h 為**合格。

3.17.13.4 氯化**效果監(jiān)測(cè):氯化**效果的日常監(jiān)測(cè)，以余氯量為指標(biāo)，在**接觸時(shí)間 2h 后測(cè)定余氯量，余氯量＞200mg/L，為**合格。

3.17.13.5 其它**因子**效果監(jiān)測(cè)。

(1)采樣方法:取 1ml **后待檢污物(固體稱取2g)，置于 5ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的采樣管中，立即送檢。

3.17.13.6 結(jié)果判定:未檢出致病菌為**合格。

3.17.14 織物**效果監(jiān)測(cè)

3.17.14.1 采樣時(shí)間:在**烘干后進(jìn)行采樣。

3.17.14.2 采樣方法:按3.17.7.2的原則執(zhí)行。

3.17.14.3 檢測(cè)方法:按3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。

3.17.14.4 結(jié)果判定:未檢出致病菌為**合格。

3.17.15 致病菌的檢測(cè)

3.17.15.1 檢測(cè)原則:致病菌的檢測(cè)依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。

3.17.15.2 金黃色葡萄球菌檢測(cè)。

取采樣液 1ml，接種于 5ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中，于36℃±1℃增菌 24h。取 1 白金耳上述增菌液，在血平板上作劃線分離，36℃±1℃培養(yǎng) 24h。

1）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：取上述可疑菌落接種于甘露醇培養(yǎng)基，于36℃±1℃培養(yǎng) 24 h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽(yáng)性。

2）血漿凝固試驗(yàn)：①玻片法：潔凈玻片一端滴一滴**生理鹽水，另一端滴一滴血漿，用白金耳挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混勻，５min 內(nèi)觀察有無(wú)固體顆粒狀物，若血漿出現(xiàn)凝塊，生理鹽水均勻混濁為陽(yáng)性，兩者均混濁為陰性。②試管法：吸取1:4新鮮血 0.5ml，放在**小試管中，再加入等量待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物，混勻后放入36℃±1℃孵箱中，同時(shí)以已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌肉湯培養(yǎng)物作對(duì)照，每 30s.觀察一次，６h 內(nèi)出現(xiàn)凝塊者為陽(yáng)性。

3.17.15.3 乙型溶血性鏈球菌檢測(cè)

(1)增菌、分離:取樣品 1ml，接種于1％葡萄糖肉湯，37℃增菌24h。取 1白金耳增菌液在血平板上作劃線分離，36℃±1℃培養(yǎng) 24h。

鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿 0.2ml（0.02g 草酸鉀加 5ml 人血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清），加入 0.8ml **生理鹽水混勻后再加入待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物 0.5ml和 0.25% 氯化鈣 0.25ml，混勻，放入36℃±1℃水浴中，每２min 觀察一次（一般 10min內(nèi)可凝固），待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化的時(shí)間，如２h 內(nèi)不溶化，移入孵箱觀察 24h 的結(jié)果，如全部溶化為陽(yáng)性；24h 仍不溶解者為陰性。

桿菌肽敏感試驗(yàn)：將被檢菌濃菌液涂于血平板上，用**鑷子取含菌 0.04 單位桿菌肽紙片放在平板表面上。同時(shí)以已知陽(yáng)性菌株作對(duì)照，于36℃±1℃18h～24h，有抑菌帶者為陽(yáng)性。

3.17.15.4 沙門菌檢測(cè):參照GB4789.4 (食品中沙門菌檢測(cè)方法)。 

3.17.16 試劑與培養(yǎng)基的配制：按附錄A 進(jìn)行。