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凱氏定氮法測定黃豆的粗蛋白含量
日期：2025-02-07 07:00
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摘要：
凱氏定氮法測定黃豆的粗蛋白含量
一、原理
利用硫酸及催化劑與食品試樣一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中C、H形成CO2、H2O逸出，而氮以氨的形式與硫酸作用，形成硫酸銨留在酸液中。然后將消化液堿化，蒸餾，使氨游離，用水蒸氣蒸出，被硼酸吸收。用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定所生成的硼酸銨，從消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液計算出總氮量，再折算為粗蛋白含量。
2NH2-(CH2)2-COOH + 13H2SO4 → (NH4)2 SO4 + 6CO2 + 12SO2 + 16H2O
(NH4)2SO4 + 2NaOH → 2NH3 + Na2SO4 + 2H2O
2NH3 +4H3BO3 → (NH4)2B4O7 + 5H2O
(NH4)2B4O7 + 2HCl + 5H2O→2NH4Cl + 4H3BO3
二、儀器與試劑
1、100mL凱氏燒瓶
2、微量凱氏定氮裝置
3、試劑
硫酸銅 硫酸鉀 硫酸 2%硼酸溶液
混合指示劑:0.1%甲基紅乙醇溶液與0.1%甲基藍(lán)乙醇溶液,臨用時按2:1的比例混合.或0.1%甲基紅乙醇溶液與0.1%溴甲酚綠乙醇溶液,臨用時按1:5的比例混合。
20%NaOH溶液 0.01mol/L HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液
三、測定方法
1、樣品消化：
準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的黃豆粉0.3g左右，小心移入干燥的凱氏燒瓶中（勿粘附在瓶壁上），加入0.5g CuSO4、3g K2SO4及10mL濃硫酸，于瓶口倒插入一口徑適宜的干燥管，用膠管與水力真空管相連接，利用水力抽出消化過程所產(chǎn)生的煙氣。先以小火緩慢加熱，待內(nèi)容物完全炭化，泡沫消失后再加大火力，消化至溶液透明呈藍(lán)綠色。取下抽氣管，繼續(xù)加熱 0.5h,冷卻至室溫。
取20mL蒸餾水，徐徐加入燒瓶中，待樣品冷至室溫，移入100mL的容量瓶中，用蒸餾水沖洗燒瓶數(shù)次，并入容量瓶，旋轉(zhuǎn)混勻放冷，再用蒸餾水定容，備用。
同時做一空白消化。
2、蒸餾與吸收：
1>按蒸餾裝置圖安裝好裝置，將所有的夾子打開。取下樣品加入口的磨口塞，從樣品加入口加入50mL的蒸餾水，再插回塞好。并給冷凝管接通冷凝水。
2>往蒸汽發(fā)生瓶加入蒸餾水至其體積的三分之二處，加入幾粒沸石和4滴甲基橙，再加入3mL濃硫酸，然后置于電爐上加熱使水沸騰。
3>產(chǎn)生蒸汽后，夾上夾子1，讓蒸汽經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)入反應(yīng)管外套，待廢液排放口排出蒸汽后，夾上夾子3，使蒸汽進(jìn)入反應(yīng)管，蒸餾洗滌10分鐘。打開夾子1，同時夾上夾子2，待反應(yīng)管內(nèi)的水全部排出到外套后，打開夾子3，排出廢水。馬上從進(jìn)樣口加入蒸餾水約20mL，立即再夾上夾子3，待水排出，反復(fù)操作3次，洗滌完畢。
4>將全部夾子打開，吸取10mL樣液（或空白液）從樣品加入口加入到反應(yīng)管內(nèi)，插上磨口塞。量取25mL2%硼酸置于250mL錐形瓶內(nèi)，然后將此吸收液置于冷凝管下端，冷凝管下端應(yīng)插入到液面以下。再從樣品加入口加入約20mL20%NaOH溶液使反應(yīng)管內(nèi)的樣液有黑色沉淀生成或變成深藍(lán)色，用少量水洗滌加入口，插好磨口塞，并用少量水封口。
5>夾上夾子1，讓蒸汽經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)入反應(yīng)管外套，待廢液排放口排出蒸汽后，夾上夾子3，使蒸汽進(jìn)入反應(yīng)管，蒸餾開始，待吸收液變藍(lán)后計時蒸餾10分鐘,將冷凝管下端提離吸收液面，再蒸餾1分鐘，用萘氏試劑檢查無氨后，停止承接蒸餾液。打開夾子1，同時夾上夾子2，待反應(yīng)管內(nèi)的樣品廢液全部排出到外套后，打開夾子3，排出廢液。馬上從進(jìn)樣口加入蒸餾水約20mL，立即再夾上夾子3，待水排出，反復(fù)操作洗滌3次，再作樣品平行測定。測定完畢，打開全部夾子，停止加熱，待冷卻后拆除裝置并洗滌干凈。
3．滴定：
用0.01mol/LHCl滴定吸收液至變?yōu)榧t色為終點，記下消耗的HCl體積。
四、計算：
蛋白質(zhì)% =
C —HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度mol/L
V1 —滴定樣品吸收液消耗的HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積mL
V2 —滴定樣品空白液消耗的HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積mL
m — 黃豆粉的質(zhì)量g
F —黃豆的蛋白質(zhì)含量換算系數(shù)5.71
