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分光光度法測定火腿腸中亞硝酸鹽的含量
日期：2025-02-06 05:13
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摘要：
光光度法測定火腿腸中亞硝酸鹽的含量
一、原理
樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅色染料，通過測定吸光度可與標(biāo)準(zhǔn)進行比較定量。
二、試劑
亞鐵***溶液：稱取10.6g K4Fe(CN)6.3H2O溶于水定容100mL.
乙酸鋅溶液：稱取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸，溶于水定容50mL。
飽和硼砂溶液：稱取5g NaB4O7 .10H2O溶于100mL熱水中，冷卻備用。
20%鹽酸：取54mL濃鹽酸加水45mL。
0.4%對氨基苯磺酸：稱取0.4g對氨基苯磺酸溶于100mL20%鹽酸中。
200ug/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液：精密稱取0.1000g經(jīng)硅膠干燥24小時的亞硝酸鈉（GR），加水溶解后，定容500mL。
5.0ug/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液5.0mL于500mL容量瓶中用重蒸餾水定容。
三、儀器
電爐 電熱恒溫水浴鍋 玻棒 漏斗 鐵架臺
燒杯（200mL2個，500mL2個，50mL1個）
容量瓶（250ml1個） 吸管（2mL,5mL,10mL,50mL各1支）
比色管（50mL10支）
四、操作步驟
1、樣品處理
稱取3g左右火腿腸于50mL燒杯中，加入飽和硼砂溶液6.3mL，以玻棒攪勻，用70℃左右的重蒸餾水約100mL將其洗入250mL的容量瓶中，置于沸水浴中加熱15分鐘，取出，一邊轉(zhuǎn)動一邊加入5mL亞鐵***溶液，搖勻，再加入5mL乙酸鋅溶液以沉淀蛋白質(zhì)。定容，混勻，靜置半小時，除去上層脂肪，過濾，棄去初濾液30mL，收集濾液備用。
2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置入7支50mL比色管中，各加入0.4%對氨基苯磺酸2mL,混勻，靜置3-5分鐘后各加入1.00mL 0.2%鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15分鐘，用2cm比色皿，以零管調(diào)零，于538nm處測量吸光度，以亞硝酸鈉含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3、樣液測定
吸取40mL樣品處理液于50mL比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制步驟進行，測定吸光度，通過吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出亞硝酸鈉的含量（ug）。
五、計算
亞硝酸鈉的含量(g/kg) =
X —— 40mL樣品處理液中亞硝酸鈉的含量（ug）
M —— 火腿腸的質(zhì)量（g）
