餅干中抗氧化劑BHT的測(cè)定

（本法參照GB/T5009·30-2003）

一、原理

試樣通過水蒸氣蒸餾，使BHT分離，用甲醛吸收，遇鄰聯(lián)二茴香胺與亞硝酸鈉溶液生成橙紅色物質(zhì)，用三氯甲烷提取，可進(jìn)行比色定量。

二、試劑

1、無水氯化鈣

2、甲醇

3、三氯甲烷

4、甲醇（50%）

5、亞硝酸鈉溶液：3g/L，避光保存。

6、鄰聯(lián)二茴香胺溶液：稱取125mg鄰聯(lián)二茴香胺于50ml棕色容量瓶中加25ml甲醇，振搖使其溶解，加50mg活性炭，振搖5min過濾，取20.0ml濾液置于另一50ml棕色容量瓶中，加鹽酸（1+11）至刻度。臨用時(shí)現(xiàn)配并避光保存。

7、BHT標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.050g BHT，用少量甲醇溶解，移入100ml棕色容量瓶中，并稀釋至刻度，避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于0.050g BHT。

8、BHT標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)吸取1.0mlBHT標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于50ml棕色容量瓶中加甲醇至刻度，混勻，避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于10.0 g BHT。

三、儀器

1、水蒸氣蒸餾裝置。

2、甘油浴。

3、分光光度劑

四、測(cè)定步驟

1、試樣處理

稱取2~5g粉碎試樣（約含0.40mgBHT）于100ml蒸餾瓶中，加16.0g無水綠化鈣粉末及10.0ml水，當(dāng)甘油浴溫度達(dá)到165℃恒溫時(shí)，將蒸餾瓶浸入甘油浴中，連接好水蒸氣發(fā)生裝置，冷凝管下端浸入有50ml甲醇的200ml容量瓶中，進(jìn)行蒸餾，蒸餾速度1.5~2ml/min，在50~60min內(nèi)收集約100ml餾出液（連同原有的甲醇共約150ml，蒸汽壓不可太高，以免油滴帶出），以溫?zé)岬募状挤执蜗礈炖淠?，洗液合并于容量瓶中并稀釋至刻度?/span>

2、測(cè)定

準(zhǔn)確吸取25.0ml上述處理后的試樣溶液，移入用黑紙（布）包扎的100ml分液漏斗中，另準(zhǔn)確吸取0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mlBHT標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于用黑紙（布）包扎的60ml分液漏斗中，加入甲醇（50%）至25ml。分別加入5ml鄰聯(lián)二茴香胺溶液，混勻，再各加2ml亞硝酸鈉溶液，振搖1min,放置10min，再加入10ml三氯甲烷，劇烈振搖1min,靜置3min后，將三氯甲烷層移入用黑紙（布）包扎的10ml比色管中，管中預(yù)先放入2ml甲醇，混勻。用1cm比色皿以三氯甲烷為參比，于波長(zhǎng)520nm處測(cè)定吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，比較定量。

五、          結(jié)果計(jì)算

式中：

X-試樣中BHT的含量，g/kg

m₂-測(cè)定用樣液中BHT的質(zhì)量，g

m₁-試樣質(zhì)量，g

V₁-蒸餾后樣液總體積，ml

V₂-測(cè)定用吸取樣液的體積，ml